[辅助检查]二、PCR 及其衍生技术

PCR及其衍生技术包括：限制性酶切PCR（PCR‐RFLP）。第二步，退火（annealing）所谓退火，在这里是指温度下降到适合特异引物能够与模板DNA完成碱基互补的过程。引物退火温度的设置依赖于引物的长度和引物的GC含量，一般来讲，退火温度可以根据T m值来估算，退火温度一般设定比引物的T m低5℃。有时会出现交叉退火的现象，引物可能会与模板上很近似靶基因的区域互补，导致一个非目标序列DNA扩增。也可能引物相互退火，形成二聚体。除了引物的设计，最适实验条件的摸索也非常重要，如退火温度的选择、Mg2 ＋ ......