配制溶液Ⅱ时,先将NaOH加至水中混匀,再加10%SDS,以免局部NaOH浓度过高,遇SDS后产生絮状沉淀。此步骤作用时间不宜过长,否则共价闭合环状质粒DNA可发生不可逆的变性,导致内切酶切割困难,质粒DNA迁移率降低,EB染色效率低。注意:质粒DNA溶液中应去除RNA,否则在酶切电泳时由于大量RNA的存在促使质粒DNA泳动过快,不能准确判定大小。以上的这些方法不接触酚、氯仿等,一般可在20~40分钟内获得(去除RNA的)高纯度质粒DNA,可明显提高工作效率。电泳酶切产物,观察结果。 ......