三、基于真病毒的表型耐药检测方法

在生物安全Ⅲ级实验室进行实验。病毒的分离、复制与保存: 1）正常人PBMC的分离培养：正常人PBMC的分离是真病毒分离、复制成败的关键步骤。细胞经PHA刺激培养2～3天后，即可以用来分离和复制病毒。2）临床患者病毒的分离和复制：a ﹒病毒的分离：采集抗凝外周全血，抗凝剂使用ACD、CPD、肝素或EDTA。B ﹒病毒的复制：为得到所需量和病毒滴度的病毒，需要进行病毒的复制，其方法是：取10 × 10 6经PHA刺激培养3天后的健康人PBMC，用RPM I1640培养液混匀，终浓度3 × 10 6／ml，加入 ......