一、蛋白泛素化分析

泛素（ubiquitin，Ub）是由76个氨基酸组成的8.6kDa蛋白分子，在细胞中广泛存在。它的C末端的甘氨酸残基提供了一个与其他蛋白分子连接的游离羧基，可共价键结合在其他蛋白分子的赖氨酸侧链氨基上，称为泛素化（ubiquitination）。结合多个Ub时称为多泛素化，单一Ub结合即为单泛素化。在免疫沉淀纯化蛋白前需要使细胞裂解液充分变性,以排除其他泛素化蛋白质与目的蛋白非共价相互作用的干扰，证明目的蛋白被泛素化共价修饰。例如，含有RING结构域的一类E3泛素连接酶的活性中心常有一个含半胱氨酸和组氨酸 ......