第五节 其他种类PCR

扩增一段与已知序列相邻的未知序列的片段，一对引物与已知序列互补，但方向相反。反应前先将模板酶切，然后连接环化，使其引物方向成相对。这种方法主要是利用已知序列来扩增其相邻的未知序列。其成功与否取决于此相邻未知片段与已知片段序列是否包含有合适的酶切位点。65℃15min灭活，或使用酚/氯仿抽提一次。将酶切消化的基因组片段吸入另一无菌EP管中，加入T4 DNA连接酶和连接缓冲液，16℃水浴12h以上。重新用酚/氯仿抽提一次，乙醇沉淀，最后溶于双蒸水中。 ......