[辅助检查]四、实时定量PCR常见问题及优化方案

实时定量PCR与传统PCR相比具有特异性强、重复性好、灵敏度高的特点。但实时定量PCR较传统PCR反应体系更复杂，影响因素较多，如果设计或操作不当常出现一些问题。优化方案是设计更好的引物或探针。避免引物或探针降解可在进行实时定量PCR实验前通过电泳检测其完整性。实时定量PCR由于使用了荧光物质作为定量工具，敏感度通常能达到102拷贝/ ml，对数期分析线性范围很宽，为0～1011拷贝/ ml。影响实时定量PCR敏感性的因素众多，除了对一般PCR反应均存在的影响因素如反应体系、Taq酶的活性之外，还需注意如 ......