五、抗体的分泌和纯化

以下的操作步骤是将ScFv基因克隆入分泌表达载体如pPNL9，转染酿酒酵母YVH10细胞，通过6‐His标签进行纯化。由于培养上清中可能含有抑制6His‐IMAC纯化的成分,所以应进行以下处理：细胞离心，将上清移入新的管中。纯化前加入0.5mol／L NaCl和0.05%的Tween20，同时取500 μ l10倍浓缩，用4%～12%的Bis‐Tris胶进行纯化效率和纯度分析。向上清中加入Ni‐NTA琼脂糖珠(每毫升溶液可以吸附0.5～1mg抗体,通常情况下加入200 μ l的琼脂糖珠混合液）。洗脱:加入 ......