五、改良的PCR基因突变法

因为一般PCR所使用的DNA聚合酶，大多只能扩增小于5kb的DNA，所以必须将欲突变的基因分成两段来扩增，然后再将连接完整的片段克隆到适当的载体中。最新的方法，是以PCR扩增整个含有所欲改变的基因的载体。虽然TaqDNA聚合酶的合成速率较高，但因不具校正的功能，所以平均每合成一万个碱基，就会发生一个错误，此种错误可被PyrococcusGB‐D热稳定DNA聚合酶修正，故DNA合成的效率因而提高。利用此法进行基因突变时，首先要将含有欲改变基因的载体，以甲基化酶如CpG甲基转移酶作用，将DNA上的C甲基化，再 ......