（七）ES细胞系的建立

如果是传代的ES细胞，建立ES细胞系是十分必要的。胚胎内细胞团的克隆培养步骤如下：1 .制备有滋养层细胞的24孔板：每孔加入1ml含（5～。2 .将3.5天胚泡的单个胚胎分别培养在24孔板中，培养3～4天，胚胎黏附到滋养层细胞上，胚胎的内细胞团开始增殖，形成大的细胞团。吸出培养基，加入1ml PBS，将细胞团转移到96孔板内，加50～100 μ l胰酶/ EDTA（消化2～5分钟），使细胞团松散，然后再将松散的细胞接种到有滋养层细胞的24孔板上（最好用机械法，用拉长的玻璃吸管将它们切割成2～10个小块。 ......