四、ScFv抗体的亲和力成熟突变库的建立和高亲和力克隆的筛选

利用突变引物和PCR方法扩增突变库的ScFv基因.载体和基因片段双酶切并纯化。3）混合，建立连接反应体系，转化酵母细胞。用c‐myc抗体鉴定表达全长ScFv抗体的克隆（在建立突变库的过程中，可能在插入片段内引入终止密码或目的片段被切断）。加入抗原（抗原量约为亲本抗体克隆能结合抗原量的1／。通常情况下, 5%～20%的细胞为c‐myc阳性表达ScFv的细胞，其中10%～20%可以结合抗原。所以从107细胞中可以筛选出103～104细胞，而50%的细胞可以形成克隆。另外，还可以再分选两轮，选取染色最深和0.1 ......