固定时间过长,浸蜡、烤片温度过高,导致抗原丢失,无法补救。固定液不合适,或浓度不对,导致固定不佳。第一抗体没加。补救办法:染过的片子用缓冲液洗干净后,再加一抗,按步骤重新染过。DAB显色剂里双氧水没加,现象是全部不着色,加双氧水后再显色。孵育的时间太短,没按要求时间孵育,从一抗开始重新染过。解决办法:保证温箱温度在37℃,或增加孵育时间,如一抗4℃过夜。有的抗体在正常组织中表达很强,而在肿瘤时表达很弱,或不表达。消化方法有误,或处理时间不正确。像微波处理时间不够或温度不正确。缓冲液p H值不正确。 ......