将绵羊红细胞(SRBC)免疫过的小鼠脾细胞制成细胞悬液,与一定量的SR‐BC在琼脂凝胶内混合,在补体参与下,使抗体产生细胞周围的SRBC被溶解,从而在每个抗体形成细胞周围形成一个肉眼可见的溶血空斑。免疫脾细胞悬液的制备:每只小白鼠经尾静脉注射2×108/ml的SRBC 0 ﹒ 2ml,或腹腔注射4 × 108/ml的SRBC 1ml,将免疫后4d的小鼠断颈处死,取脾脏放入pH7.2含Ca2 +、Mg2 +的Hanks液中漂洗,置青霉素小瓶或无菌平皿中将脾脏剪碎,过100目钢网制成脾细胞悬液。滴加数滴甘油‐PBS液,盖上盖玻片,在荧光显微镜下观察,计数200个淋巴细胞中胞浆内出现荧光染色的细胞数目,计算阳性细胞百分率。
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