甲氨蝶呤如需与氟尿嘧啶、硫唑嘌呤、阿糖胞苷合用,应先用本品,否则本品疗效减弱。水杨酸类(如阿司匹林)、对氨水杨酸能取代本品与血浆蛋白结合,从而使其毒性增加。这是因为甲氨蝶呤与血浆蛋白的结合率高,可被高蛋白结合药磺胺药如磺胺嘧啶等所置换,并在肾排泄部位相互竞争,使甲氨蝶呤的血药浓度明显提高,胃肠道及骨髓的毒性反应加强。当与酒精同服时可干扰胆碱合成,使肝毒性增加,转氨酶升高。因此,用药期间禁饮酒精和含酒精饮料。