[文献资料]二、实验步骤

组织匀浆的制备是高质量总RNA提取的关键环节。2 ﹒在试管中分别加入新鲜配制的RT控制反应混合液9.5 μ l，5 ×反应缓冲液6.0 μ l，RNasin RNA抑制剂0.5 μ l（终浓度为10～20u），10mmol／L dNTP各2.0 μ l（终浓度为0.3mmol／L），5u／μ l AMV转录酶1.0 μ l（终浓度为5u）。为了监测任何来源的污染，PCR反应应包括阴性和阳性对照。而用激光扫描仪则非常简便，先将PCR产物加样在琼脂糖凝胶上，经溴化乙啶染色后出现荧光，可直接对DNA进行定量分析。将神经营养因子cDNA的荧光值与GAPDH对照的荧光值进行比较。5 ﹒神经营养物质mRNA水平是以阴性对照的百分比来表达的。