百日咳疫苗抗原免疫动物后可产生保护性抗体。利用供试品疫苗和国家参考品疫苗相似的不同稀释度,通过平行免疫小鼠求出二者的ED 50值(半数有效剂量),由参考疫苗与被检疫苗ED 50之比(称为免疫力比值)乘以参考疫苗的效价,即可获得供试品疫苗的相对效价(IU/ml)。至少使用三个稀释度的参考疫苗和供试疫苗,分别免疫小鼠(每个稀释度之间不超过五倍),每稀释度至少免疫16只小鼠,每只小鼠各腹腔注射0.5ml。参考苗及供试苗的浊度测定及稀释、免疫、攻击等操作必须严谨准确,以免动物出现不规律死亡结果。