[速览]3﹒准备用于标记蛋白的CyDye溶液

1 ﹒ 5×体积的高等级DMF把CyDye原料稀释至1个体积,使CyDye的浓度为400pmol／μ l，取2 μ l染料贮藏液加3 μ l DMF（例如，5 μ l有2000pmol CyDye。如果标记蛋白的量超过50 μ g的话，那么你就必须使用与同一块胶上所有样本的染料和蛋白质保持同样的比例。标记反应中CyDye的用量由所分析的蛋白样本的类型决定，下面是我们标记大肠杆菌裂解物的例子：加50μg的蛋白样本至无菌微离心管中。加1μl10mmol/L的赖氨酸终止反应,混合振荡微离心管，暗处冰浴10分钟。只要它们与2D‐DIGE标记技术的兼容性能在控制试验中评估，那么一定范围的细胞洗液如75mmol／L磷酸盐缓冲液（PBS）就可用于DIGE技术有关的试验中。