青霉素G主要是对一些革兰阳性、阴性球菌和革兰阳性杆菌有效,抗菌谱包括链球菌、肺炎球菌、葡萄球菌(大部分菌株对本品耐药)、脑膜炎球菌、淋球菌(相当部分菌株耐药)、白喉杆菌、破伤风杆菌以及螺旋体、放线菌等。它对产酶葡萄球菌、革兰阴性杆菌、分枝杆菌、支原体、立克次体以及真菌、病毒等是无效的。抗假单胞菌青霉素本类药物对革兰阳性菌的抗菌作用较弱,而对各种革兰阴性菌有较强的抗菌作用,抗菌谱包括氨苄西林有效的一些细菌外,还包括铜绿假单胞菌(假单胞菌属的一种),吲哚阳性变形杆菌、肠杆菌、沙雷菌属以及厌氧菌等。其他的青霉素透过脑膜的性能差,一般难以解决颅内感染问题。
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