取新生(1~3d)SD或Wistar大鼠,处死后75%乙醇浸泡5min,快速分离四肢长骨,清除附着的软组织,于MEM或Media 199培养液(含10%~15%胎牛血清,青霉素100U/ml,链霉素100 μ g/ml,pH 7.2)中机械刮切吹打制备细胞悬液,冰浴中备用。