等电聚焦是通过一个pH梯度来完成的。在一定的pH条件下,蛋白质会发生质子化或去质子化。蛋白质的净电荷就是氨基酸侧链中所有负电荷和正电荷的总和。这些净电荷可以绘制在以pH为刻度的图谱上。该曲线与X轴的交点就是等电点(pI)— — —即在该pH值时,净电荷为零(图1‐3‐。当蛋白质处于pH梯度中一定的pH值环境时,接通电场,它就会开始向与它所带净电荷相反的电极移动。加样:如下图所示,有两种方法可将蛋白质样品加入固相pH梯度的胶条中。然后开始加电压,电压上升的模式为缓慢上升。等电聚焦完成后的胶条若不能及时进行第二向电泳,胶条可于- 20℃保存。
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