五、考马斯亮蓝G‐250 染色法（CBB 染色法，Biuret法）

考马斯亮蓝G‐250法于1976年由Bradford建立。考马斯亮蓝G‐250具有红色和蓝色两种色调，在酸性溶液中，其以游离态存在呈棕红色，当通过疏水作用，考马斯亮蓝G‐250染料上的阴离子与蛋白质‐NH3 ＋结合后，变为蓝色。蛋白质和色素的结合反应很快速，约在2分钟左右的时间内达到平衡，在室温1小时之内是稳定的。在0.01～1.0mg蛋白质／ml范围内，蛋白质含量与A595值呈正比。3 ﹒还有一些用于微量蛋白质定量的方法，如根据和银相结合的能力，可测定含量在15～2000pg的蛋白质含量，比考马斯亮蓝法灵敏100倍。蛋白含量高的样品需用生理盐水进行稀释或用双缩脲试剂进行测定,双缩脲测试范围为1～15mg／ml。