将待检人的PBM、用SPA包被的SRBC(SPA‐SRBC)、兔抗人Ig抗体、补体四种成分混合,灌入用两张玻片做成的小室,密封好,放入温箱培养1~3h,在此期间,作为抗人Ig抗体的免疫IgG的Fc段可与SRBC表面SPA结合,当Ig分泌细胞分泌出游离的Ig分子时。这些人Ig分子与SRBC表面的抗人Ig抗体结合形成免疫复合物,即可活化补体,使SPA‐SRBC溶解,因此在Ig分泌细胞周围形成一个圆形的溶血区,称为溶血空斑,每一个溶血的空斑就代表一个Ig分泌细胞。针对细胞表面不同抗原,可以使用两种不同的荧光染料,如用异硫氰荧光素(FI CTL)发黄绿荧光,用罗丹明(T MRI CTL)发红色荧光。
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