此法需要先对质粒DNA进行标记,对于将放射性标记引入DNA区段的方法,70年代后发展了两种在体外对核酸进行放射性标记的方法:①由T4噬菌体多核苷酸激酶催化的磷酸化法,即将ATP的γ‐磷酸转到DNA或RNA的5 ′羟基端。切口平移法,此法利用大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ,把双链DNA上未标记的核苷酸置换成放射性元素如α‐32 P标记的核苷酸。这两种反应均快速有效,所用放射性前体仅为代谢标记法的1/1000~1/100,而产生的探针活性的比活度则较之要高出一个数量级。在标记核素的选择上,主要是考虑核素的半衰期和射线的性质。
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