（二）PCR反应中的主要成分

PCR反应产物的特异性由一对上下游引物所决定。引物设计和选择目的DNA序列区域时可遵循下列原则：①引物长度约为16～30bp，太短会降低退火温度影响引物与模板配对，从而使非特异性增高。引物5′端对扩增特异性影响不大,可在引物设计时加上限制酶位点、核糖体结合位点、起始密码子、缺失或插入突变位点以及标记生物素、荧光素、地高辛等。引物不与模板结合位点以外的序列互补。所扩增产物本身无稳定的二级结构，以免产生非特异性扩增，影响产量。一般PCR反应中的引物终浓度为0.2～1.0 μ mol／L。利用紫外分光光度计，可精确计算引物浓度，在1c m光程比色杯中，260nm下，引物浓度可按下式计算：X（mol／L）＝ OD260／A。