[解剖学&组织学]四）特定m RNA水平的测定实例

TRizol试剂。ZK15型台式高速冷冻离心机。无菌操作取C57小鼠海马，加1ml TRizol试剂匀浆，15～30℃水浴保温5分钟，以使核蛋白复合物充分解离。PCR扩增βNGF和各肌动蛋白基因:扩增βNGF基因所用引物序列如下,预期扩增片段长度为735bp（含前肽序列）。PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，经溴化乙锭（EB）染色后，用Bio‐Rad‐Gel‐Doc‐1000凝胶成像分析仪测定各条带的扫描积分值，扫描值对所投入的总RNA量双对数作图。6、12月龄C57小鼠海马，抽提总RNA并RT，在优化的PCR条件（β NGF选30个循环，‐actin选22个循环, PCR模板量选择相当于200ng总RNA的RT产物量）下，分别扩增β NGF（N）和β‐actin（A）基因。