[速览]三、蛋白磷酸化定位

哺乳动物细胞中的蛋白质约三分之一是磷酸化的，质谱逐渐成为分析蛋白质磷酸化位置的重要工具。Watts等在用T细胞受体（TCR）刺激T细胞后，用HPLC‐ESI‐MS鉴定体内酪氨酸在淋巴细胞特异蛋白酪氨酸激酶ZAP‐70上的磷酸化位置。为鉴定酪氨酸‐磷酸化肽，将一蛋白酪氨酸磷酸酶微反应器与CE或HPLC和ESI‐MS联用。加入b‐消去／乙硫醇（b‐elimina tion／ethanethiol）修饰磷酸化蛋白，使磷酸丝氨酸和磷酸苏氨酸残基转变为S‐乙基半胱氨酸或b‐甲基‐S‐乙基半胱氨酸残基，将修饰后的蛋白进行水解，水解物用微柱液相色谱。电喷雾串联（MS／MS）离子阱质谱和数据库检索进行分析，确定初始的磷酸化残基。