答:在标记免疫测定中,最常用的标记物有放射性核素、酶、荧光素、化学发光剂和胶体金等。主要结合原理如下:

  1. 放射性核素的标记最常用的是氯胺T标记法;氯胺T在水溶液中分解生成具有氧化性的次氯酸,可以将125 I- 氧化生成125 I+ ,后者具有一价正电荷,可取代被标记物分子中酪氨酸残基苯环上的氢原子,从而使被标记物标记上125 I,最后向溶液中加入还原剂偏重亚硫酸钠即可终止标记反应。
  2. 酶与抗原或抗体的结合通常采用戊二醛交联法,戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合,形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。
  3. 荧光素抗体的标记方法采用搅拌法和透析法。以异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记为例,在碱性溶液中,FITC的异硫氰基能与抗体蛋白的自由氨基形成硫碳酰胺键,进而结合在抗体上。
  4. 化学发光剂的标记是通过化学反应将发光剂连接到抗原或抗体上,按照标记反应的类型及形成结合物的特点,可将标记反应分为 “直接偶联”和 “间接偶联”两种方式;直接偶联是通过偶联反应,使标记物分子中反应基团直接连接到被标记物分子的反应基团上,如碳二亚胺缩合法、过碘酸钠氧化法、重氮盐偶联法等;间接偶联法使用功能交联剂在标记物分子和被标记物分子之间插入一条链或一个基团,使两种物质通过引进的 “桥联基团”连接成结合物,此法应用范围广,如琥珀酰亚胺活化法。
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