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医院感染管理方法学进展

在研究医院感染时,经常要判定某些病原体的变异规律和遗传关系,需要对微生物进行准确、适当的分型和分类,以确定这些微生物与疾病的发生、传播和流行之间的关系,最终制定防治措施。传统的分型方法如形态学、血清分型、生化分型等,只能分析到微生物的种、型或亚型水平,很难肯定相互之间是否具有同源性,难以判定具体的传染来源与传播类型。分子流行病学方法具有特异性和灵敏性高、稳定性好、所需标本量少等显著优点,使微生物分类、分型更为明确、简便,已成为医院感染研究中必不可少的重要工具。

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医院感染控制中常用的分子流行病学方法有哪

答:医院感染中可能使用的分子流行病学研究方法包括:①全细胞可溶性蛋白图谱分析,主要包括SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白质免疫印迹技术(Western blot);②以染色体DNA为基

医院感染控制中常用的分子流行病学方法有哪些?
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如何评价分子流行病的方法学?

答:常用五个指标来评价分型系统:①分型能力,对每种分离物提供肯定结果的能力;②重复性,当菌株重复实验时产生相同结果的能力;③分辨力,区分无关分离物的能力;④容易解释和应用;⑤费用

如何评价分子流行病的方法学?
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以PCR为基础的基因分型方法有哪些?

答:以PCR为基础的基因分型方法有:随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)、随机引物PCR(arbitrary primer,AP-PCR)、扩增片段长度多态性(amplified fragment leng

以PCR为基础的基因分型方法有哪些?
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目前原核生物基因组中用于分型的重复性序列

答:原核生物基因组中用于分型的重复性序列主要有两种:①基因外重复回文元件(repetitive extragenic palindromic elements,REP元件);②细菌内基因重复一致序列(enterobacterial rep

目前原核生物基因组中用于分型的重复性序列有哪些?
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何为裂解酶片段长度多态性分析(CFLP)?有何特点

答:裂解酶Ⅰ是一种热稳定酶。核酸在95℃变性后,当温度降至50~60℃时,被分开的单链DNA与互补链结合之前自身形成特定的发夹圈,产生许多由非配对单链区域连接的茎环结构。裂解酶Ⅰ

何为裂解酶片段长度多态性分析(CFLP)?有何特点?
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什么是脉冲场凝胶电泳(PFGE)?

答:脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis)是由普通的琼脂糖凝胶电泳演化而来的,用低频率切割酶原位消化细菌基因组,产生数量有限(约5~20个)、长度10~800kb的大片段DNA,在

什么是脉冲场凝胶电泳(PFGE)?
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哪些因素可影响PFGE的结果?

答:PFGE试验的影响因素有电压梯度(voltage gradients)、琼脂糖的种类和浓度、电泳温度、电泳缓冲液、再定位角度、电泳时间、二次电泳等。

哪些因素可影响PFGE的结果?
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操作脉冲场凝胶电泳PFGE时有哪些注意事项?

一、选取适当的参考菌株,所为适当,表示此参考菌株经由特定限制性内切酶切割后,应具备已知片段大小,且范围大小要涵盖测试菌株欲测定片段的最大与最小片段。由于胶体两侧及中间部

操作脉冲场凝胶电泳PFGE时有哪些注意事项?
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多位点序列分析(MLST)有何特点?

答:MLST是一种新的DNA分子指印技术,具有高分辨力的分型方法。细菌内部有7个管家基因,这些基因片段长度不同,并且在不同菌株中,每一片段由于不同的等位基因而有不同的序列。用7对

多位点序列分析(MLST)有何特点?
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在流行病学调查研究中MLST与PFGE有何差别?

答:MLST适合长期大范围的流行病学调查研究。所得的实验结果因可提供更细致的序列讯息以解开菌株的演化过程,更易于解释菌株与流行病学间相关性,亦容易在不同实验室间作分析比对

在流行病学调查研究中MLST与PFGE有何差别?
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什么是多基因座限制性分型法(MLRT)?

答:多基因座限制性分型法(multilocus restriction typing,MLRT)在MLST基础上,加以改进的新分型法,是一种简单、快速、重复性好的多基因座分型法。此法首先针对管家基因的七个基因

什么是多基因座限制性分型法(MLRT)?
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MLRT较MLST有何优势?

答:MLST通过自动化核酸序列分析仪分析实验所标序列“多重管家基因”(multiple housekeeping genes)变得非常耗时,再加上昂贵的自动化核酸序列分析设备与荧光标记的降

MLRT较MLST有何优势?
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以质粒DNA为基础的同源性分析方法有哪些特

答:质粒同源性分析包括质粒图谱和质粒酶切图谱。这种方法是根据质粒的数量和相对分子质量来绘制图谱。同一种菌株可能含有不同类型和大小的质粒,提取后在电场中呈现不同的迁移

以质粒DNA为基础的同源性分析方法有哪些特点?
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全细胞可溶性蛋白图谱分析方法有哪些?各自有

答:蛋白质是基因的表达产物,对细菌蛋白质的检测分析可以了解核苷酸的某些特征。应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白质免疫印迹技术(Western印迹)可在分子水平上对菌株进

全细胞可溶性蛋白图谱分析方法有哪些?各自有什么特点?
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什么是单链构象多态性?

答:单链构象多态性分析(single strand conformation polymorphism,SSCP)是由Orita等于1989年首先建立的分析核酸(DNA和RNA)有无变异的方法。其基本原理是单链核酸在非变性聚丙烯酰

什么是单链构象多态性?
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什么是染色体DNA限制性内切酶图谱分析?

答:染色体DNA限制性内切酶图谱分析(restriction endonuclease analysis of chromosomal DNA,REA),染色体DNA经高频切割、限制性内切酶消化获得酶切图谱。不同的DNA所具有的限制性

什么是染色体DNA限制性内切酶图谱分析?
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什么是随机引物PCR,有何特点?

答:随机引物PCR是Williams和Welsh等于1990年建立了一种基于PCR的基因分型方法,分别称为随机扩增多态性DNA(RAPD)和随机引物PCR(AP-PCR)。两者在本质上是相同的,一般选用9~10bp任一指

什么是随机引物PCR,有何特点?
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什么是扩增片段长度多态性分析?

答:扩增片段长度多态性(AF1P)是由荷兰科学家和Vos发展起来的一种检测DNA多态性的新方法,最初应用于植物基因组,最近更多应用于细菌基因组。AFLP也建立在PCR基础上,直接在凝胶上检

什么是扩增片段长度多态性分析?
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什么是rep-PCR?

答:rep-PCR是在随机引物PCR(PAPD)的基础上发展起来的一种新方法。RAPD是随机选择一个非特异性引物在不严格条件下使引物与目的DNA中许多序列通过错配而进行扩增,rep-PCR的引物不

什么是rep-PCR?
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影响扩增的DNA指纹可靠性和重复性的因素有

答:由于在25℃下引物可与模板DNA非特异结合,它们产生的图谱是人为可变性和真正多态性混杂在一起的结合物,重复性很差。影响因素包括:①Mg2+浓度;②Taq聚合酶浓度和来源厂商;③DNA

影响扩增的DNA指纹可靠性和重复性的因素有哪些?
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