自1977年Sanger建立双脱氧链末端终止法测序技术, DNA序列测定已经成为分子生物学的主要实验技术之一,是分子诊断学公认的金标准。手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学裂解法,两种方法虽然原理大相径庭,但都生成相互独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸,每组核苷酸都有共同的起点,却随机终止于一种(或多种)特定的碱基。形成一系列以某一特定核苷酸为末端的长度各不相同的寡核苷酸混合物,这些寡核苷酸的长度由这个特定碱基在待测DNA片段上的位置所决定。然后通过高分辨率的变性聚丙烯酰 ......