[速览]三、核心实验方法

SDS碱裂解法制备质粒DNA：小量制备。用碱和SDS处理可以从小量（1～2ml）细菌培养物中分离质粒DNA，所获得的质粒可以用电泳或限制性核酸内切酶消化的方法鉴定。将细菌沉淀重悬于100μl冰预冷的碱裂解液Ⅰ中,剧烈振荡。在第一个酶的反应完成后，取少量消化产物通过电泳来确定是否所有的质粒DNA已从环状变为线状分子。苯酚:氯仿抽提及乙醇沉淀法纯化被消化的外源DNA片段。离心柱层析加常规乙醇沉淀纯化载体DNA,除去由多克隆位点中两个靠近的限制酶位点经限制酶消化后产生的小片段DNA。转化时,应包括用标准方法制备 ......