第六节　昙花一现的PCR结果

2011年5月下旬，本人开始着手质粒载体构建的实验。于5月22日提取细胞总RNA后，采用某公司逆转录试剂盒逆转录成cDNA ，并设计相应靶序列的引物交于某公司合成。5月29日采用梯度PCR仪初次验证引物，以退火温度52 ℃为中心，前后10 ℃范围内各孔均出现目的条带，这提示引物设计成功。其中， 52.1 ℃退火对应的孔条带较亮且特异性较高。整个提取RNA 、逆转录和随后PCR的实验步骤均参照实验室前辈留下的protocol ，实验室里公用的逆转录试剂盒已经用了很长时间。实验中应注意试剂盒使用频率和时间对实 ......