第十二节　PCR扩增攻略

基因编码区或者侧翼区DNA的克隆是进行下一步功能研究或者调控机制研究的关键。因此， PCR技术在前期研究中扮演重要角色，是功能研究和调控机制研究的重要基础。PCR技术有几个关键点：模板、引物和反应体系，其中，目的片段的不同特性影响引物和反应体系的选择。刚开始，我选择Progema公司的PCR Mix作为反应体系，经过半个月的努力，已获得大部分基因的编码区，然而个别基因多次PCR扩增均无结果，主要原因是这些基因的编码区较长（大于2.5k ） ，并且高GC含量（超过60% ） 。多次改变退火温度进行扩增无果后 ......