第二章　Western blotting方法

最近做Western blotting实验，目的蛋白分子量约25kD ，一抗来源于国外某试剂公司，二抗是本课题组公共使用的，尚未出现过问题。我们分析，内参照条带清晰，而目标条带分子量较小，只有25kD ，故排除没有转到膜上可能性，最大可能是蛋白转过了，而我们转膜用的是孔径0.45 μ m PVDF膜，未想到用小孔径膜。Western blotting实验中许多操作步骤是比较固定的，但是目标蛋白分子量大小不同，转膜条件也需要作相应改变。大分子量蛋白质转膜时间需延长，而小分子量蛋白（如30kD以下）转膜时间需 ......