[辅助检查]三、PCR 引物及设计原则

引物长度一般为10～30个核苷酸。同时，引物自身不应存在互补序列，否则引物自身会折叠成发夹结构或引物本身复性。引物5 ′端限定PCR产物的长度，但对扩增特异性影响不大。简并引物（degenerate primers）是指碱基序列不同，但有相同碱基数的一组针对某一基因相同区域的寡核苷酸混合物。原则上引物的简并程度越低越好，虽高达1024倍的简并引物已成功地用于PCR，但是最好不超过516倍。同时，DNA聚合酶也可发挥5 ′ → 3 ′聚合活性，此即发生了非特异性扩增。图4‐10b表示引物形成3 ′突出发夹结 ......