二、PCR循环测序

PCR技术能够快速、特异性地扩增靶DNA，应用PCR技术测定DNA序列分两个步骤：先利用PCR扩增靶序列片段，制备测序模板，然后再利用PCR直接测定序列。PCR测序采用了热循环高效合成DNA的特性并结合双脱氧核苷酸终止法，使引物链终止的延伸产物数量在热循环过程中得到增加，因此称为循环测序。一个测序反应循环结束后，与延伸产物互补结合的靶DNA模板经过高温变性，可再成为单链模板引发引物链的退火、延伸与终止，产生高显影度的序列梯带。循环测序采用耐热DNA聚合酶，测序反应可以进行多次循环，因此循环测序是以双脱氧链 ......