一、双脱氧测序法的原理

在正常的DNA体外合成反应体系中，加入的核苷酸单体为4种2 ′-脱氧核苷三磷酸（dATP、dCTP、dGTP和dTTP）。Sanger测序法的基本原理如图3-1所示：利用4种2 ′，3 ′-双脱氧核苷三磷酸（ddNTP）代替部分脱氧核苷酸（dNTP）作为底物进行DNA合成反应。一旦ddNTP掺入到合成的DNA链中，由于核糖的3 ′位碳原子上不含羟基，不能与下一核苷酸反应形成磷酸二酯键，因此，正在延伸的DNA链在此终止。测序时，首先将模板分为4组，加入引物启动DNA的合成，用带标记（如核素标记）的dNTP（ ......