第二节 RNA的分离纯化技术

其中rRNA、tRNA和核内小分子RNA具有确定的大小和核苷酸序列，可用电泳、密度梯度离心、阴离子交换或高效液相层析等技术分离。抑制内源RNA酶的做法是加入蛋白变性剂，如酚、氯仿、SDS、盐酸胍、异硫氰酸胍、十二烷基肌氨酸钠、β‐巯基乙醇等。分离RNA主要可采用两种途径，一是经过酚、氯仿等有机溶剂抽提，由于核酸是水溶性的，不溶于有机溶剂，因此可去除蛋白杂质。二是利用酸性条件下DNA和RNA溶解情况不同，而直接在酸性条件下用有机溶剂抽提，让RNA留在水相。收集水相，再用乙醇或异丙醇沉淀RNA。加入氯仿后离心 ......