[辅助检查]第三节 单菌落扩增与小量DNA制备

在培养板上挑选单一菌落，培养扩增，从小量（2～5ml）细菌培养物中分离质粒DNA，提取的质粒DNA可用于电泳、酶切、连接与转化。从大肠杆菌中分离小量质粒DNA方法众多，目前常用的是碱变性法、煮沸法、SDS法、层析法等。各方法分离是依据宿主菌株类型、质粒分子大小、碱基组成及结构等特点加以选择的，其中碱变性法既经济且收得率较高。方法步骤:将细菌沉淀,所得沉淀重悬于100 μ l用冰预冷的溶液Ⅰ中，剧烈振荡。必须使细菌沉淀在溶液Ⅰ中完全分散，将两个微量离心管的管底部互相接触振荡，可使沉淀迅速分散。试剂盒中的层析 ......