[辅助检查]九、杜克雷嗜血菌基因的定向诱变

由上述可知，杜克雷嗜血菌基因可用转座子Tn916和Tn1545‐Δ 3使之发生突变。然而一旦杜克雷嗜血菌基因克隆至大肠杆菌，即可用作为一更为直接的诱变方法。因此，可将杜克雷嗜血菌靶基因克隆至此菌不能复制的大肠杆菌质粒（p UC18），基因的一部分缺失，并可用标准克隆技术使之为一套氯霉素耐药性序列组件所替代。所形成的质粒再用于电穿孔法中冲击杜克雷嗜血菌，突变株可在含有氯霉素的平板上筛选，然后进行适当表型丧失的检测。这一步骤至关重要，因为并不是所有的氯霉素耐药性转化体都具有适当的表型。 ......