一、标签融合蛋白结合实验基本步骤

以GST融合蛋白结合实验为例，基本实验过程见图12-6 A。在此，GST-融合蛋白和待测蛋白均可通过细胞裂解物、纯化蛋白、重组表达以及体外转录翻译系统等方法获得。GST融合蛋白的表达纯化可以通过考马斯亮蓝染色直接进行观察，对于与GST-融合蛋白有相互作用的目的蛋白其丰度往往会比较低，因此可以借助标签抗体或目的蛋白的特异性抗体进行检测。同时，也可以考虑利用其他类似于哺乳细胞的、具有相似转录后修饰的表达系统，如昆虫细胞-杆状病毒表达系统，进行GST融合蛋白的表达，这样就可以弥补以上缺陷。 ......