第三节 基因整合位点遗传稳定性的检验方法

可提取转基因生物基因组DNA，用限制性内切酶进行酶切，电泳后以外源插入片段的边界序列设计探针，进行Southern杂交，割取有杂交信号的电泳条带与克隆载体进行粘端连接，筛选克隆，测定序列，可得到重组发生位点的信息。在经过数代遗传后，对重组发生区（生物基因组与外源插入片段的边界序列）进行进一步的PCR扩增测序，可得出基因插入位点遗传稳定性的信息。采用单侧特异性引物扩增基因的调控区序列的方法可同样得到基因整合位点两侧序列信息。也可直接用PCR产物进行序列测定。 ......