[文献资料]第二节 PCR基本操作及条件优化

PCR基本操作包括模板的制备、扩增反应及产物的检测三大方面。引物长度决定其解链温度（Tm），Tm ＝ 4（G ＋ C）＋ 2（A ＋ T），一般退火温度比Tm低5℃，但应注意退火温度不要超过TaqDNA聚合酶的最适温度（74℃），以保证PCR反应的特异性。变性后迅速冷却至40～60℃，使引物退火并结合到靶序列上，退火温度的高低直接影响产物的特异性，退火温度与时间，取决于引物的长度、碱基组成及其浓度，还有靶基序列的长度。微孔板夹心杂交法操作简便、快速、避免了同位素标记探针的危害，显色反应与常规ELISA相似 ......