[速览]步骤9 凝胶内消化

在消化前进行还原和烷基化处理，记住使用在2‐D电泳中第一和第二范围内用过的烷基化试剂。还原,加10 μ l二硫苏糖醇溶液（25mmol／L碳酸氢氨中5mmol／L二硫苏糖醇）到凝胶plug中（足够覆盖住胶片），60℃温育30分钟。烷基化,加10 μ l碘乙酰胺到凝胶plug和带中（25mmol／L碳酸氢氨中有55mmol／L碘乙酰胺），室温暗处放置30分钟。用外科针按压凝胶p lug位，把它固定原位并切割之，把切下片段移至用水洗涤过eppendorf管中。用乙腈来脱凝胶plug水份（3 × 25 μ l，每次10分钟），凝胶plug开始变白，三次洗涤后，它会完全变白。再水化步骤。把干燥的胶置于酶缓冲液中（在50mmol／L碳酸氢氨中）冰浴45分钟。