[速览]4﹒沉淀

一份粗提取物可能含有磷脂或核酸等污染物质，这会在凝胶的酸性部分被银染成水平条纹，因此蛋白质沉淀通常用来除去这些污染物质。2D提纯试剂盒运用沉淀剂定量沉淀样品中的蛋白质，通过离心使之形成蛋白小球，然后洗涤进一步去除非蛋白质污染。经过两次离心残留的蛋白小球在裂解液中重悬。以下流程A适用于体积在1～100 μ l含有1 μ g～1mg蛋白质的样品。提示：微离心管的管盖铰链处应始终朝外，如此蛋白小球可始终处于管壁的同一位置，以此减少损失。加入300μl沉淀剂,混匀。加1ml预冷的洗涤缓冲液和5μl的洗涤添加液,打散小球，但不会溶解。离心12000g, 5min，去除一切不溶物质，去除泡沫，上清可直接用于IEF或保存于－ 80℃。