五、羰基化蛋白检测

羰基蛋白的形成是检测蛋白质氧化损伤的重要指标之一，酶联免疫吸附法（ELISA）是检测羰基蛋白的敏感方法。细胞匀浆液与2，4‐二硝基苯肼（DNPH）反应，形成的蛋白腙衍生物在酶标板上与抗DNPH抗体反应。氧化BSA可Fenton反应获得，即用Cu2 ＋／H2O2（500 μ M／5mM）与BSA（1mg／ml）反应1小时，可通过比色法对羰基蛋白进行定量测定，用已知羰基蛋白含量的氧化BSA与未氧化的BSA按一定比例（0～40%）混合制作标准曲线。最后以0.18mol／LH2O2液终止反应，于450nm处测定吸光度，根据标准曲线计算细胞内羰基蛋白含量。