[速览]三、反向双杂交技术（reverse two‐hybrid system或counter electable two‐hybrid system）

反向酵母双杂交系统的关键是掺入一种表达产物对细胞生长有毒的报告基因，用于监测蛋白间的相互作用。按照反选择策略，一类方法是设计一种能直接或间接地导致细胞毒性或死亡的报告基因，正常的蛋白相互作用后引发细胞死亡。而蛋白与蛋白结合区的突变或其他外界因素若干预蛋白间的相互作用时，报告基因就不表达，细胞得以存活。在含α‐氨基乙酸盐的培养基中，LYS2报告基因的表达。另一类方法则是将营养性报告基因（如H IS3）置于tet操纵子之下，若有蛋白相互作用，就表达抑制因子TetR，TetR结合到tet操纵子上后抑制报告基因的表达，在营养缺陷的选择性培养基上，细胞不能存活，只有蛋白的相互作用被阻断后，转化子才能生长。