三、常用造血干／祖细胞培养技术

骨髓细胞制备:无菌取骨髓液2～3ml，用Ficoll‐Hypaque密度梯度离心法分离制备单个核细胞悬液。1）直接观察法：培养红系祖细胞常用支持物是无色透明的甲基纤维素溶液，在倒置显微镜下可直接观察与计数细胞集落。1）形态学：混合造血基质细胞层主要是成纤维细胞（大而多角形）、巨噬细胞（小星形）、内皮细胞（圆或卵圆形）。培养至第11～13天，造血基质细胞达亚融合状态，即得混合造血基质细胞层，如需要完全融合状态的造血基质细胞层，则可继续培养，一般需要14～20天。5）造血基质细胞特征的鉴定基本同人造血基质细胞。