[文献资料]三、梯度洗脱方法的建立

以反相键合相高效液相色谱为例，介绍用二元混合溶剂流动相进行梯度洗脱的一般步骤。在建立多组分样品的色谱分离方法前，一般需要选择一个初始梯度洗脱色谱条件对样品进行色谱分离的预试验，然后根据预试验结果决定：①是选择等度洗脱还是梯度洗脱进行HPLC分析。若要进行梯度洗脱HPLC分析,应该如何在初始梯度洗脱的色谱条件上进行进一步的优化。流动相：水－乙腈，梯度洗脱时间（gradient time）t G ＝ 60min，在60min的梯度洗脱时间内流动相中乙腈的比例从5%线性梯度升至100%。在梯度洗脱中改变梯度变化速率是改善k和α最有效的方法，因此在优化其他色谱条件之前，应先优化梯度变化速率。