荧光素染料最初是由Adolf von Baeryer在1871年合成的,随后发现该染料可以用于多种角膜病变的诊断。1882年, Paul Ehrlich发现兔子在胃肠外给予荧光素钠后眼内有荧光素钠存在。直到1955年,才有多位研究者对于动物从静脉注入荧光素钠进行了研究, MacClean和Maumenee则将之用于人眼。1959年,两名来自美国印第安纳的医学生Harald Novotny和David Alvis ,利用眼底照相机和光源技术,确立了视网膜荧光素血管造影技术原则,使得血管造影技术的发展跨出了决定性的一步。1960年1月,他们获得了第一例人类视网膜荧光素血管造影图像。游离的荧光素分子通过脉络膜毛细血管内皮、然后通过Bruch膜,进入色素上皮细胞间,在色素上皮封闭小带处受阻。
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