为什么ELISA操作均需有封闭的步骤？

答：固相载体在抗原或抗体包被后，吸附的蛋白仅占固相载体表面的一小部分，而留有许多空余位置，这些空余位置是造成酶标记物非特异性黏附，导致检测背景增高的主要原因。因此，在包被后需用封闭剂封闭酶联板上未结合抗原或抗体的微孔，则结合抗体或抗原时就不会出现非特异性结合，不会影响检测的准确度。常用的封闭剂有酪蛋白、脱脂奶粉、山羊血清、BSA及明胶等；其中酪蛋白形成单层分子膜，与固相载体的吸附率极强，几乎可以阻断所有酶标记抗体的非特异性吸附，1μg/ml浓度可达到94%的封闭效果，山羊血清使用浓度为5%～10%，BSA为10mg/m l，加封闭剂后置37℃2小时，均能封闭90%以上的空余位点。