为什么ELISA反应需要一定时间的孵育？

答：ELISA反应的实质是抗原-抗体特异性结合。抗原抗体完成结合反应的保温过程称为孵育；每次孵育是为了使特异性的抗原抗体彻底结合，以避免在洗脱时把还没来得及与特异性抗原结合的抗体洗掉，这需要时间。ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面发生。以抗体包被的夹心法为例，加入反应孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和固相结合的机会，只有最贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才能达到反应的终点。温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在建立ELISA方法作反应动力学研究时，两次抗原抗体反应一般在37℃经1～2小时，产物的生成可达顶峰。为加速反应，可提高反应的温度，有些试验在43℃进行，但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应在4℃更为彻底，放射免疫测定多在冰箱中过夜，以形成最多的沉淀；但因所需时间太长，在ELISA中一般不予采用。